dynamické BIOSENSORS řešení normalizace heliXcyto
Klíčové vlastnosti
- Pro normalizaci fluorescenčních signálů na Spotu 1 a Spotu 2 heliX cyto čipu
- Umožňuje správné odkazování na červené nebo zelené fluorescenční signály v reálném čase během měření RT-IC
- Kompatibilní se všemi heliX cyto čipy
- Normalizační roztok-Ra nese středně hydrofilní červené barvivo s jediným kladným čistým nábojem
- Normalizační roztok-Ga nese hydrofilní zelené barvivo s jediným záporným čistým nábojem
Popis produktu
Číslo objednávky: NOR-0
Tabulka 1. Informace o obsahu a úložišti
| Materiál | Víčko | Koncentrace | Množství | Skladování |
| Normalizační roztok-Ra | Pomerančový | 10 uM | 3x 100 ul | -20 °C |
| Normalizační roztok-Ga | Zelený | 10 uM | 3x 100 ul | -20 °C |
Pouze pro výzkumné použití.
Tento produkt má omezenou dobu použitelnosti, viz datum spotřeby na štítku.
Příprava
Vyberte barvu normalizačního roztoku (Ga nebo Ra) odpovídající barvě štítku analytu. Zřeďte 10 µM normalizační zásobní roztok na pracovní koncentraci s běžícím pufrem.
Konečný objem požadovaný pro experiment lze nalézt v heliOS sample zásobník view testu.
Koncentrace normalizačního roztoku by měla přibližně odpovídat koncentraci fluoroforu v nejvyšší koncentraci analytu, která má být měřena. To lze vypočítat pomocí následující rovnice:
: Koncentrace normalizačního roztoku v požadované barvě
: Koncentrace barviva ve značeném roztoku analytu
: Nejvyšší koncentrace analytu, která by měla být měřena
: Stupeň značení (poměr barviva k analytu)
Naředěné roztoky lze skladovat při teplotě 2–8 °C po dobu až 7 dnů.
DŮLEŽITÉ: Nemíchejte dohromady normalizační roztok-Ra a normalizační roztok-Ga, pokud nenastavujete měření Dual Color (paralelní čtení zeleného a červeného kanálu).
Poznámka k aplikaci
Při měření RT-IC by měl být fluorescenční signál normalizačního roztoku v a podobný rozsah jako nejvyšší signál pocházející z navázaného analytu (surová data).
Absolutní fluorescenční signál je závislý na koncentraci normalizačního roztoku a excitační síle použité při měření. Budicí výkon je třeba zvolit na základě následujícího parametru:
a. Koncentrace fluoroforu v roztoku analytu:
Koncentrace fluoroforu závisí na koncentraci analytu použité při měření a také na stupni značení analytu. Pro vysoké DOL a vysoké koncentrace analytu může být nutné snížit excitační výkon.
b. Očekávaný vazebný signál:
Vysoce exprimované cíle na buňce mohou vázat více molekul značeného analytu. V případě vysoce nadměrně exprimovaných cílů lze očekávat silný vazebný signál. Aby se předešlo uzavření závěrky, může být zváženo snížení budícího výkonu.
c. Typ čipu:
Různé typy čipů mají různé fluorescenční pozadí. Čím větší pasti a čím více pastí na čipu, tím vyšší je signál pozadí. Proto mohou čipy L5 vyžadovat nižší budicí výkon než čipy M5.
Pro výchozí bod excitačního výkonu a normy. koncentrace roztoku, která se má použít v experimentu RT-IC, viz tabulka 2.
Tabulka 2. Vztah koncentrace fluoroforu, koncentrace normalizačního roztoku a excitačního výkonu vhodného pro čip heliX cyto M5
| Analytové barvivo konc. = konc analytu x DOL | Budicí síla | Roztok pro normalizaci koncentrace | Roztok pro normalizaci ředění |
| 25 nM | 0.5 | 25 nM | 1:400 |
| 50 nM | 0.3 | 50 nM | 1:200 |
| 100 nM | 0.2 | 100 nM | 1:100 |
| 300 nM | 0.1 | 300 nM | 1:33 |
| 500 nM | 0.08 | 500 nM | 1:20 |
| 1 uM | 0.05 | 1 uM | 1:10 |
| 2.5 uM | 0.02 | 2.5 uM | 1:4 |
Poznámka: Tato tabulka je pro vaši orientaci. Konečný signál zaznamenaný v heliX cyto však závisí na mnoha faktorech. Pro každý systém bude tedy vyžadována určitá optimalizace.
Kontakt
| Dynamic Biosensors GmbH | Dynamic Biosensors, Inc. |
| Perchtinger Str. 8/10 | 300 Trade Center, Suite 1400 |
| 81379 Mnichov | Woburn, MA 01801 |
| Německo | USA |
Informace o objednávce order@dynamic-biosensors.com
Technická podpora support@dynamic-biosensors.com
ZÁKAZNICKÁ PODPORA
www.dynamic-biosensors.com
Nástroje a čipy jsou konstruovány a vyráběny v Německu.
©2024 Dynamic Biosensors GmbH | Dynamic Biosensors, Inc. Všechna práva vyhrazena.
Dokumenty / zdroje
 |
dynamické BIOSENSORS řešení normalizace heliXcyto [pdfUživatelská příručka NOR-0, normalizační roztok heliXcyto, heliXcyto, normalizační roztok, roztok |
