dynamická sada BIOSENSORS heliX plus Reduceing Agent Kit 1

Klíčové vlastnosti

• Umožňuje redukci disulfidových vazeb pomocí TCEP.
• Kompatibilní s proteiny a protilátkami (MW > 20 kDa).
• Místně specifická redukce protilátek.
• Okamžitá vazba redukovaných molekul je možná (viz uživatelská příručka HK-MAL).
• Redukce více ligandů může být provedena současně.
• Obsahuje činidla pro dvě individuální redukční reakce.

Popis produktu

Číslo objednávky: RK-PA-1

Tabulka 1. Informace o obsahu a uložení

Materiál	Víčko	Množství	Skladování
TCEP (500 mM)	Červený	2 x 20 ul	-20 °C
Snížení vyrovnávací paměti [1]	Bílý	2 x 1.8 ml	-20 °C
Čistící kolona	Červený	4 XNUMX x	2-8 °C
2.0 ml reakční zkumavky pro purifikační rotační kolonu		4 XNUMX x	RT
Odstředivá filtrační jednotka (10 kDa MWCO)		2 XNUMX x	RT
Centrifugační sběrná zkumavka		4 XNUMX x	RT

Pouze pro výzkumné použití.

Tento produkt má omezenou dobu použitelnosti, viz datum spotřeby na štítku.

DŮLEŽITÉ

Produkty mohou být zasílány při různých teplotách, ale skladování by mělo být v souladu s pokyny uvedenými v tabulce. Suspenze pryskyřice v čistící rotační koloně obsahuje 0.02 % azidu sodného.

Jsou vyžadovány další materiály

Tabulka 2. Další materiály

Materiál	Komentáře
Stolní mikrocentrifuga	Požadovaný rozsah otáček mezi 1,000 13,000 xg až XNUMX XNUMX xg
Vír
1.5 ml reakční zkumavky

Všechny potřebné roztoky a pufry jsou součástí sady.

3-kroková redukce biomolekuly v reakční zkumavce

Před zahájením si přečtěte celý protokol a provádět všechny kroky bez přerušení.

TIP	Tento protokol může být prováděn současně pro více kopulačních reakcí

Výměna pufru protein/protilátka

1. Navlhčete membránu odstředivé filtrační jednotky 100 µl redukčního pufru.
2. Přidejte cca. 200 µg (až 500 µg) proteinu/protilátky do filtrační jednotky z kroku 1. V případě potřeby přidejte do filtru redukční pufr, dokud nedosáhnete maximálního objemu 450 µl a centrifugujte při 13,000 14,000 xg (až 5 XNUMX xg) po dobu XNUMX min a zlikvidujte průtok.
3. Přidejte 350 µl redukčního pufru a odstřeďujte při 13,000 5 xg po dobu XNUMX minut a průtok znovu zlikvidujte.
4. Opakujte krok 3 ještě jednou s konečnou dobou odstřeďování 10 minut, abyste získali konečný objem cca. 80 ul.
5. Sbírejte sample buď pomocí 100 µL pipety do nové zkumavky nebo umístěním filtračního zařízení dnem vzhůru do nové odstředivé zkumavky, centrifugujte 2 minuty při 1000 x g.

Snížení pomocí TCEP

1. Připravte 2.5 mM roztok TCEP v redukčním pufru přidáním 1 ul 500 mM TCEP do 199 ul redukčního pufru.
   Připravte vždy bezprostředně před použitím.
2. Přidejte redukční vyrovnávací paměť do sampdo lahvičky na celkový objem 98 ul a přidejte 2 ul 2.5 mM roztoku TCEP pro získání konečné koncentrace 50 uM TCEP. Reakci promíchejte pipetováním nahoru a dolů.
3. Inkubujte roztok při 37 °C při 400 otáčkách za minutu po dobu 2 hodin, aby byla zajištěna úplná redukce.

Čištění a koncentrace

1. Uveďte do rovnováhy dvě čisticí kolony (červené víčko) pro jedno vymytí TCEP:
   a. Odstraňte spodní těsnění kolony a povolte uzávěr (neodstraňujte uzávěr).
   b. Umístěte kolonu do 2.0 ml reakční zkumavky.
   c. Odstřeďujte při 1,500 1 × g po dobu XNUMX minuty, abyste odstranili skladovací roztok.
   d. Přidejte 400 µl redukčního pufru do pryskyřičného lože kolony. Centrifugujte při 1,500 1 × g po dobu XNUMX minuty, abyste odstranili pufr.
   e. Opakujte krok d a zlikvidujte výsledný pufr z reakční zkumavky. Čistící rotační kolona by nyní měla být v suchém stavu.

mytí TCEP

a. Umístěte kolony z předchozího kroku do nových 1.5 ml reakčních zkumavek.
b. Odstraňte uzávěr odstředivé kolony číslo 1 a jemně nalijte sample na vrchol pryskyřičného lože.
c. Centrifugujte při 1,500 xg po dobu 2 minut, abyste shromáždili sample (průtok). Po použití čisticí kolonu zlikvidujte.
d. Odstraňte uzávěr odstředivého sloupce číslo 2 a nalijte sample z předchozího kroku do pryskyřičného lože.
e. Centrifugujte při 1,500 xg po dobu 2 minut, abyste shromáždili sample (průtok). Po použití čisticí kolonu zlikvidujte.
f. Thiolová spojka dle uživatelské příručky (HK-MAL-1 nebo HK-MAL-2) snížené sample lze provést.

Další informace

Výměna a koncentrace pufru s odstředivými filtračními jednotkami 

1. Vezměte jednu odstředivou filtrační jednotku, přidejte příslušný objem pufru do filtračního zařízení a uzavřete jej.
2. Umístěte filtrační zařízení s uzávěrem do rotoru odstředivky a vyrovnejte pásek uzávěru směrem ke středu rotoru; protiváhu s podobným zařízením.
3. Roztočte zařízení při 13,000 14,000 xg (nebo XNUMX XNUMX xg) po danou dobu.
4. Odstraňte průtok a opakujte kroky 1-3.
5. Vyjměte sestavené zařízení z centrifugy a oddělte filtrační zařízení od zkumavky pro mikrocentrifugu.
6. Chcete-li získat konjugát, umístěte filtrační zařízení dnem vzhůru do čisté odstředivé zkumavky a vyrovnejte otevřený uzávěr směrem ke středu rotoru; protiváhu s podobným zařízením. Odstřeďováním po dobu 2 minut při 1,000 XNUMX xg se přenese sample ze zařízení do trubice.
   

Užitečná objednací čísla

Tabulka 3. Objednací čísla

Název produktu	Množství	Objednávka č
spojovací sada heliX ® Thiol 1	5 XNUMX x	HK-MAL-1
spojovací sada heliX ® Thiol 2	5 XNUMX x	HK-MAL-2
Odstředivá filtrační jednotka (3 kDa MWCO)	5 ks.	CF-003-5
Odstředivá filtrační jednotka (10 kDa MWCO)	5 ks.	CF-010-5
10x Buffer A [2]	50 ml (výtěžek 500 ml)	BU-P-150-10
5x Buffer B [3]	50 ml (výtěžek 250 ml)	BU-P-1000-5

Kontakt

Dynamic Biosensors GmbH	Dynamic Biosensors, Inc
Perchtinger Str. 8/10	300 Trade Center, Suite 1400
81379 Mnichov	Woburn, MA 01801
Německo	USA

Informace o objednávce order@dynamic-biosensors.com
Technická podpora support@dynamic-biosensors.com

1. Snížení vyrovnávací paměti: 100 mM Na2HP4/NaH2P4, 300 mM NaCl, 5 mM EDTA, pH 7.4
2. Vyrovnávací paměť A: 50 mM Na2HP4/NaH2P4, 150 mM NaCl, pH 7.2
3. Vyrovnávací paměť B: 50 mM Na2HP4/NaH2P4, 1 M NaCl, pH 7.2

ZÁKAZNICKÁ PODPORA

www.dynamic-biosensors.com
Nástroje a čipy jsou konstruovány a vyráběny v Německu.
©2024 Dynamic Biosensors GmbH | Dynamic Biosensors, Inc. Všechna práva vyhrazena.

Dokumenty / zdroje

dynamická sada BIOSENSORS heliX plus Reduceing Agent Kit 1 [pdfUživatelská příručka RK-PA-1, heliX plus sada redukčního činidla 1, heliX plus, sada redukčního činidla 1, sada činidla 1, sada 1

Reference

• Uživatelská příručka